2025年10月3日江蘇知原藥業(yè)股份有限公司的Om Sambhaji Shelke研究團隊在《Journal of Pharmaceutical Innovation》（IF=5.2）期刊發(fā)表了一項題為“IVRT and IVPT of Desonide Lotion and Cream: Correlation with Human Bioequivalence Study"研究。針對外用制劑傳統(tǒng)臨床終點生物等效性研究成本高、耗時長、流程復(fù)雜的問題，開發(fā)并驗證了地奈德（Desonide）乳膏和洗劑的體外釋放試驗（IVRT）與體外滲透試驗（IVPT）方法，結(jié)合皮膚發(fā)白試驗，建立了外用制劑的生物等效性評估體系。

摘要

背景：外用生物等效性（BE）研究對于批準價格親民且安全性和有效性與原研藥相當?shù)姆轮扑?/span>很重要。然而，外用制劑的傳統(tǒng)臨床終點研究成本高昂、耗時漫長且流程復(fù)雜。本研究探索了體外釋放試驗（IVRT）和體外滲透試驗（IVPT）方法，并通過生物等效性研究進一步評估制劑。

方法：IVRT方法以pH 4.0醋酸緩沖液中的50%乙醇為受體介質(zhì)，采用尼龍66合成膜開發(fā)并驗證，該方法具有良好的線性、精密度、靈敏度和穩(wěn)健性。IVPT方法以豬皮作為人體皮膚的替代模型，生理鹽水為受體介質(zhì)，旨在實現(xiàn)測試制劑與參比制劑的累積滲透率和滲透速率具有可比性。皮膚發(fā)白試驗分別納入18名和100名受試者。

結(jié)果：IVRT試驗中，洗劑的測試制劑與參比制劑90%置信區(qū)間為97.78%107.1%，乳膏為93.5%112.8%（符合75%133.33%的接受標準）；乳膏和洗劑的測試制劑與參比制劑均在24小時達到滲透速率（Jmax），其T/R比分別為100.0%和110.0%（90%置信區(qū)間符合80%125%標準）；累積滲透率的T/R比分別為95.2%（乳膏）和104.5%（洗劑）。滲透試驗后，乳膏測試制劑和參比制劑的平均回收率分別為97.4±7.7%和101.6±10.5%，洗劑分別為88.2±5.1%和86.8±3.9%。IVRT和IVPT結(jié)果均證實了生物等效性，皮膚發(fā)白試驗進一步驗證了測試制劑的生物等效性。

結(jié)論：研究結(jié)果表明，測試制劑與參比制劑具有相似的釋放和滲透特性，支持其在人體中的生物等效性。這種整合方法凸顯了IVRT和IVPT作為外用皮膚藥物制劑開發(fā)和體外生物等效性評估的可靠工具的應(yīng)用價值。

實驗材料與儀器

材料

制劑：含0.05%地奈德的乳膏和洗劑。

試劑與化學(xué)品：所有用于IVRT和IVPT研究的試劑和化學(xué)品均為分析純，購自當?shù)毓?yīng)商。

皮膚樣本：1月齡巴馬仔豬的腹部前側(cè)皮膚。

儀器

透皮擴散系統(tǒng)、高效液相色譜儀、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀、ASCH VAPOSCAN經(jīng)皮水分流失測量儀、冷凍研磨機、分光光度計。

實驗過程

IVRT方法開發(fā)與驗證

• 受體介質(zhì)選擇：基于地奈德在不同介質(zhì)中的溶解度和化學(xué)穩(wěn)定性，篩選出pH 4.0醋酸緩沖液中的50%乙醇作為受體介質(zhì)。

• 膜選擇：通過藥物回收率和雜質(zhì)分析，確定尼龍66合成膜為適配膜。

• 采樣時間設(shè)定：設(shè)定0.5h、1h、2h、3h、4h、6h為采樣時間點，確保藥物釋放線性關(guān)系良好（R2≥0.97）。

• 方法驗證：對線性范圍、精密度、靈敏度、選擇性、回收率、質(zhì)量平衡和穩(wěn)健性等參數(shù)進行驗證，確認方法可靠。

IVPT方法實施

• 皮膚處理：仔豬腹部皮膚經(jīng)脫毛、無菌分離后，-20℃冷凍儲存（有效期2個月），使用前恢復(fù)至室溫，切成直徑約3cm的圓盤，厚度控制在500±250μm，經(jīng)TEWL分析（數(shù)值<25g/m2/h）確認皮膚完整性。

• 樣本設(shè)計：采用單劑量、兩處理、平行、每處理多重復(fù)設(shè)計，將測試和參比制劑隨機分配至A、B組。

• 試驗條件：受體介質(zhì)為脫氣的pH 7.4磷酸鹽生理鹽水，溫度維持在34℃，攪拌速度600rpm，確保皮膚溫度穩(wěn)定在32±1℃；采樣時間點為0h、2h、4h、8h、12h、24h，采樣后補充等量新鮮介質(zhì)。

• 將皮膚固定于透皮擴散池并預(yù)先恒溫至 32 ℃±1 ℃后，使用ASCH VAPOSCAN經(jīng)皮水分流失測量儀在皮片上等距取點完成三次平行測定，記錄經(jīng)皮水分流失（TWEL）數(shù)值。經(jīng)測定，CT 組、CR 組、LT 組和 LR 組的平均經(jīng)皮水分流失結(jié)果（n=18）分別為 8.361±0.85、8.367±0.99、9.811±1.58 和 9.889±1.51，所有結(jié)果均符合本研究的預(yù)設(shè)標準。

ASCH VAPOSCAN經(jīng)皮水分流失測量儀

• 藥物提取與分析：試驗結(jié)束后，刮取皮膚表面殘留制劑，提取皮膚中滲透的藥物，結(jié)合受體介質(zhì)中的藥物含量，進行質(zhì)量平衡計算。

皮膚發(fā)白試驗

• 初步研究：納入18名健康中國受試者，確定參比制劑的半數(shù)有效劑量持續(xù)時間。

• 主要研究：采用隨機、雙盲、安慰劑對照、單劑量、交叉試驗設(shè)計，納入100名健康受試者，在受試者前臂涂抹不同劑量的測試和參比制劑，于給藥后不同時間點通過分光光度計測量皮膚發(fā)白程度，評估藥代動力學(xué)終點。

分析方法驗證

• HPLC分析（IVRT樣本）：以pH 4.0醋酸溶液-乙醇（50:50）為稀釋劑，采用Zorbax Eclipse XDB-C8色譜柱，柱溫20℃，檢測波長245nm，流動相A（0.1%磷酸）與B（乙腈）比例58:42，流速1.0mL/min。

• LC-MS/MS分析（IVPT樣本）：采用ACE Excel 2 C18-AR色譜柱，柱溫40℃，流動相A（0.1%甲酸水溶液）與B（乙腈）梯度洗脫，流速0.3mL/min，電離模式為ESI+，MRM掃描模式。

實驗結(jié)論

本研究開發(fā)并驗證了地奈德乳膏和洗劑的IVRT和IVPT方法，兩種方法均表現(xiàn)出良好的可靠性和穩(wěn)健性。IVRT和IVPT結(jié)果顯示，測試制劑與參比制劑的釋放和滲透特性具有可比性，90%置信區(qū)間均在生物等效性接受范圍內(nèi)；皮膚發(fā)白試驗進一步證實了兩者在人體中的生物等效性。該研究確立的整合評估方法，不僅減少了外用制劑生物等效性研究對昂貴、耗時的臨床研究的依賴，還為仿制藥的安全性和有效性提供了有力保障，為外用類固醇制劑及其他外用皮膚藥物的仿制藥審批提供了高效、可靠的技術(shù)路徑。